DNA鉴定之微测序法

微型测序的本质是单核苷酸引物延伸（SNuPE）或单碱基延伸（SBE）。该过程首先使用PCR扩增包含目标SNP位点的DNA片段。然后将微测序引物添加到产物中，以在测序仪上进行碱基延伸反应，其中测序引物3'端的碱基与多态性碱基相邻，并且在DNA聚合酶的作用下，仅引物进行一个碱基的延伸以终止反应，即可以添加仅带有一个荧光标记的ddNTP，以通过毛细管电泳检测荧光信号类型以获得延伸碱基的信息。

与其他方法相比，该方法灵敏且重复率高。所使用的设备是大多数实验室中的常规设备，因此此方法易于推广。但是，微测序法也存在一定的问题，即在一个反应中仅检测到一个SNP时，成本较高；对涉及该引物的所有引物都有严格的要求。在复合PCR和延伸反应的过程中，需要适当的引物结构，浓度比和退火温度，且测序引物的序列通常很长，甚至超过50mer。