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DNA鉴定之微测序法

来源:http://www.zhkysw.com/news/186.html   发布时间:2020-03-05

  微型测序的本质是单核苷酸引物延伸(SNuPE)或单碱基延伸(SBE)。该方法是通过PCR扩增含有靶SNP位点的DNA片段,然后向产物添加微测序引物以在测序仪上进行碱基延伸反应,其中测序引物的第37个碱基与多态性碱基相邻。

在DNA聚合酶的作用下,引物仅延伸一个碱基以终止反应,即,可以添加仅具有一个荧光标记的ddNTP,以通过毛细管电泳检测荧光信号类型以获得延伸碱基的信息。与其他方法相比,该方法灵敏且重复率高。所使用的设备是大多数实验室中的常规设备,因此此方法易于推广。

但是,微测序法也存在一定的问题,即在一个反应??中仅检测到一个SNP时,成本相对较高;在一个反应??中检测到多个SNP时,所有涉及复杂PCR和延伸反应的引物要求严格,引物的结构,浓度比和退火温度要求适当,测序引物的序列通常很长,甚至超过50mer。

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